La LC/MS: méthode de confirmation pour l'analyse de digitaliques dans les fluides biologiques
LC/MS: confirmation method for the détermination of cardiac glycosides in biological fluide
A, TRACQUI, P. KINTZ, P. MANGIN

RÉSUMÉ

Une méthode originale par LC/MS est proposée pour l'identification et le dosage des hétérosides cardiotoniques dans les fluides biologiques. Après extraction liquide/liquide par chloroforme/2-propanol (95: 5, v/v) à pH 9,5, les extraits sont repris par le méthanol. La séparation s'effectue sur colonne Waters NovaPak C18 (150 x 20 mm ici.) à l'aide d'un gradient acétonitrile/tampon 2 mM NH4COOH, pH 3,0. La détection est assurée par le spectromètre de masse API 100 (PerkinElmer) équipé d'une interface à pression atmosphérique de type ionspray. Les temps de rétention pour 8 digitaliques sont: ouabaine, 2,01 min; lanatoside C,5,74 min; digoxine, 6, 00 min; proscillaridine, 7,33 min;digitoxine, 8,08 min; oléandrine, 8,30 min; a-acétyidigitoxine, 8,66 min; B-acétyidigitoxine, 9,01 min. Pour tous les composés (sauf ouabaine) les limites de détection dans 2 ml de plasma sont comprises entre a 15 et 960 ng/ml; la limite de détection de la digoxine est de Q 25 ng/ml. Plusieurs applications pratiques sont présentées (intoxications par digoxine, intoxication par laurier-rose). La grande spécificité de cette méthode permet l'identification formelle et nominale des différents digitaliques, ce qui constitue un avantage majeur par rapport aux techniques non séparatives conventionnelles type RIA. Cette spécificité conduit à préconiser la LC/MS comme méthode obligatoire de confirmation lorsque la mise en évidence de digitaliques dans les milieux biologiques revêt un caractère médico-légal.

SUMMARY

An original method based upon LC/MS is presented for the identification and quantitation of cardiac glycosides in biological fluide. Alter liquid/liquid extraction using chloroform/2-propanol (95: 5, v/v) at pH 9.5, extracts are resuspended in methanol. Separation is performed on aWaters NovaPak C18 column (150 x 2.0 mm, i.d.), using a gradient of acetonitrile/2 mM NH4COOH buffer pH 3.0.Detection is clone by a Perkin-Elmer API- 100 mass analyzer equipped with an ionspray atmospheric pressure interface.Retention Limes for 8 cardiac glycosides are: ouabain,2.01 min; lanatoside C, 5.74 min; digoxia 6.00 min; proscillaridine, 7.33 min; digitoxine 8.08 min; oleandria 8.30 min; a-acetyidigitoxia 8.66 min; B-acetyldigitoxia 9.01 min. For all analyses but ouabaine the limite of detection LODs) in 2 ml plasma are in the range 0.15-0.60 ng/ml; LOD of digoxin is 0.25 ng/ml. Some applications are presented (digoxin poisonings, oleanderpoisoning). This highly specificmethod allows the nominal and absolute identification of the diffèrent cardiac glycosides, which constitutes a marked improvement compared to the usure non-separative procédures such as RIA, We therefore precognize to use LC/MS as the confirmative method when the identification of digoxin and other cardiac glycosides in biological samples is of forensic relevance.