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Analyse
simultanée des principaux stupéfiants et métabolites dans le
sang total
Simultaneous analysis of major narcotics and metabolites in whole
blood
R. MOLINARO*, O. LAMPIRE, C.
MERLIN, M. LHERMITTE
Institut de Recherche Criminelle de la Gendarmerie Nationale,
ROSNY-SOUS-BOIS
* Correspondance: R. MOLINARO, Institut de
Recherche Criminelle de la Gendarmerie Nationale
1, boulevard T.-Sueur, 93111 ROSNY-SOUS-BOIS CEDEX
RÉSUMÉ
Nous décrivons une méthode d'identification et de
dosage,dans le sang total, des principales drogues et de leurs
principaux métabolites appartenant aux quatre familles
suivantes:
Les dérivés amphétaminiques dont l'amphétamine (AMP),
la méthamphétamine (MET), la méthylènedioxyamphétamine(MDA),
la méthylènedioxyméthamphétamine (MDMA) et la
méthylènedioxyéthylamphétamine (MDEA).
La cocaine (COC) et deux de ses métabolites, la
méthylecgonine (EME) et la benzoylecgonine (BE).
Les opiacés dont la morphine (MOR),
la6-monoacétylmorphine (MAM), la codéine (COD),
ladihydrocodéine (DHCOD), la codéthyline (CODET) et la
pholcodine (PHO).
Le cannabis dont le delta 9-tétrahydrocannabinol (THC) et
son métabolite majeur, I'acide I l -nor delta 9 THC carboxylique
(THCCOOH).
Un ml de sang total est soumis à une hydrolyse enzymatique puis,
après addition d'étalons internes deutérés, est extrait à pH
8,9 par un mélange chloroforme-isopropanol (9/1 v/v).Après
purification acide, la phase organique est évaporée et le
résidu sec est silylé pour donner un extrait A. La phase
aqueuse acide est alors ajustée à pH 8,9 et extraite par le
mélange chloroforme-isopropanol; la phase organique est
séparée en deux fractions identiques. Après évaporation de
celles-ci, un des résidus est acylé et porté à sec tandis que
l'autre est silylé; les deux extraits sont réunis pour donner
un extrait B. L'extrait A contient THC et THCCOOH, l'extrait B
contient les autres drogues .Les deux extraits sont
successivement analysés par chromatographie en phase gazeuse
couplée à la spectrométrie de masse (CPG/SM), en impact
électronique; I 'acquisition est réalisée en mode SIM par
sélection successive de six à dix ions par composé ou en mode
SCAN.
La quantification est réalisée, par l'intermédiaire d
'étalons internes deutérés sur au moins deux couples d 'ions.
La méthode est linéaire jusqu'à 100 ng/ml pour THC et THCCOOH
et jusqu'à 500 ng/ml pour les autres composés.Les limites de
détection varient de 0,2 à 5 ng/ml et les limites de
quantification de 1 à 20 ng/ml selon le composé étudié. Dans
la zone de concentrations supérieure à la limite de
quantification, la répétabilité est meilleure que 20 %. Chez
dix sujets non toxicomanes, il n'a pas été noté
d'interférence pouvant conduire à de faux positifs.
MOTS-CLÉS
Amphétamines, opiacés, cocaine, cannabis, CPGSM, sang.
SUMMARY
A method for the identification and quantification of major
illicit drugs and metabolites in human whole blood is presented;
the study includes:
Amphetamines and derivatives. amphetamine
(AMP),methamphetamine (MET), methylenedioxyamphetamine(MDA),
methylenedioxymethamphetamine (MDMA) and
methylenedioxyethylamphetamine (MDEA).
Cocaine (COC) methylecgonine (EME) and benzoylecgonine
(BE).
Opiates: morphine (M OR), 6 monoacetylmorphine(MAM),
codeine (COD), dihydrocodeine (DHCOD), ethylmorphine (CODET) and
pholcodine (PHO).
Cannabis: delta 9-tetrahydrocannabinol (THC) and
11-nor9-carboxy-delta 9-tetrahydrocannabinol (THCCOOH).
One ml of blood is hydrolyzed, then spiked with deuterated
standards and finally extracted at a pH of 8.9 with a mixture of
chloroform/isopropanol. After an acidic purification, the organic
phase is evapored and derivatized with BSTFA to give an extract
A. Then, the aqueous phase is adjusted at Ph 8.9 to be extracted
with a second portion of chloroform/isopropanol. The organic
phase is separated in two parts which are evaporated. The first
residue is derivatized with heptafluorobutyric anhydride and
dried and the second is derivatized with BSTFA. These two last
extracts are mixed to give an extract B.
The extract A contains THC and THCCOOH and the extract B the
other compounds These extracts are analyzed independently by
GC-MS set in electron-impact ionization mode; the SIM acquisition
is done by monitoring, successively, six to ten characteristic
ions by molecule. The quantification is realized using the
deuterated internal standards. The linearity, tested up to 100
ng/ml for THC or THCCOOH and 500 ng/ml for other compounds, is
satisfactory. The extraction recoveries and the reproducibility
have been studied for all molecules. Thedetection limite are in
the range 0.2-5 ng/ml and the quantification limite (with a
reproducibility better than20 %) in the range 1-25 ng/ml for the
majority of compounds The analysis of blood from ten non-exposed
subjects showed no positive results
KEY-WORDS
Amphetamine, opiates, cocaine, cannabis, GC-MS, blood.
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