Etude de la dégradation post-mortem de 20 benzodiazépines, 9 métabolites, de la buspirone, du zolpidem et de la zopiclone dans le sang total par  -20'C, 4'C, 25'C, 40'C pendant 6 mois
Study of post mortem degradation of 20 benzodiazepines, 9 metabolites, buspirone, zolpidem and zopiclone in whole blood at -20 C, 4'C, 25'C, 40'C during 6 months
G. PEPIN, N. DUBOURVIEUX, Y. GAILLARD, C. WACHEUX, M. CHEZE.

RESUME
Les benzodiazépines représentent la famille de médicaments la plus prescrite à ce jour D'après une étude statistique interne à notre laboratoire sur 1821 expertises toxicologiques après autopsie, 682 mettent en évidence des benzodiazépines soit 37,4% ; or. en toxicologie médico-légale, le problème de la dégradation des benzodiazépines est très fréquemment rencontré et seuls des métabolites sont parfois détectés dans les prélèvements biologiques. C'est pourquoi la dégradation de ces molécules a été étudiée. Nous avons étudié la dégradation de 20 benzodiazépines commercialisées en France, 9 métabolites et 3 apparentés, dans du sang prélevé lors d'autopsie, sur 6 mois à 4 différentes températures de stockage : -20'C, +4'C, +25'C, +40'C, à l'abri de la lumière. Les dosages ont été réalisés tous les jours pendant l0 jours, puis tous les 2 jours pendant les 10 jours suivants et tous les 5 jours pendant les 40 derniers jours ; un dernier dosage a été fait à 6 mois. Les extractions ont été réalisées sur Toxi-tubes A®, et les dosages par chromatographie liquide haute performance couplée à un détecteur à barrette de photodiodes. Cette étude permet de conclure que certaines benzodiazépines se dégradent très rapidement dans le sang post-mortem comme les nitrobenzodiazépines (clonazépam, flunitrazépam, loprazolam, nitrazépam) qui ne sont plus détectées au bout de quelques jours à température ambiante. Le chlordiazépoxide et le démoxépam ne sont plus détectés après 1 mois à 25'C. D'autres benzodiazépines se dégradent égalenient rapidement : le tétrazépam (1,5 % restant après 2 mois à 25'C et 1 % après 6 mois, 15 % restant après 6 mois à 4'C ), le bromazépam (30 % restant après 2 mois à 25'C et 20 % après 6 mois, 60 % restant après 2 mois à 4'C et 35 % après 6 mois), le lorazépam (20 % restant après 2 mois à 25'C et 1 % après 6 mois, 85 % restant après 2 mois à 4'C et 65 % après 6 mois), et le loflazépate d'éthyle (40 % restant après 6 mois à 25'C, 60 % restant après 6 mois à 4'C). La zopiclone se montre instable également, elle est complètement dégradée après 1 mois à 25'C, 55 % sont encore détectés après 2 mois à 4'C et 8 % seulement après 6 mois à cette température.

SUMMARY
Benzodiazepines are one of the most prescribed drugs. According to an internal statistical study in our laboratory over the last three years, the percentage of case files containing benzodiazepines was 37,4 % (n=682 of n= 182 1). In forensic toxicology, metabolites are sometimes all that is detected in autopsy samples, that is why the stability of anxiolytic drugs in post-mortem whole blood was examined in this study. The degradation of 20 benzodiazepines, 9 of their metabolites and 3 other anxiolytic molecules was studied over 6 months atfour different storage temperatures -200C, +40C, +250C, +40'C, without exposure to light. Determinations were performed every day during 10 days, then every 2 days during the 10following days and every 5 days during the 40 following days ;finally a last determination was done at time 6 month. Extractions were perforined using Toxi-tubes® A, while quantitation was carried out using high performance liquid chromatography equipped with a photodiode-array ultraviolet detector This study confirmed that some benzodiazepines deteriorated readily in post-mortein blood like the nitrobenzodiazepines sert . e (clonazepam, flunitrazepam, loprazolam, nitrazepam) which disappeared within a few days at room temperature, chlordiazepoxide and demoxepam which disappeared after I month at 25'C. It allowed us to conclude that some other molecules were unstable. These were : tetrazepant (1,5 % remaining after 2 months at 25'C and 1% remaining after 6 months, 15 % remaining after 6 months at 4'Q bromazepam (30 % remaining after 2 months at 25'Cand 20 % after 6 months, 60 % remaining after 2 months at 4'C and 35 % after 6 months), lorazepam (20 % remaining after 2 months at 25'C and I % after 6 months, 85 % remaining after 2 months at 4'C and 65 % after 6 months), and ethyl loflazepate (40 % remaining after 6 months at 250C, 60 % remaining after 6 months at 4'C). Zopiclone was not detectable after / month at 25'C and 55 % remained after 2 months at 4 'C and 8 % after 6 months.