Détermination des concentrations physiologiques de la norandrosterone et de la noretiocholanolone, métabolites urinaires de la nandrolone par CPG/SM

Determination of the physiological concentrations of nandrolone metabolites in human urine by GC/MS

T. JEANNEAU, P. KINTZ*, V. CIRIMELE, B. LUDES

Institut de Médecine Légale, 11, rue Humann - 67000 STRASBOURG Cedex (France)

*Auteur à qui adresser la correspondance :
Docteur Pascal KINTZ - Tél : 03 88 24 91 26 - Fax : 03 88 24 00 85
e-mail : pascal.kintz@wanadoo.fr

(Reçu le 29juillet 1998 ; accepté le 10 octobre 1998)

RESUME

Plusieurs sportifs incrimines récemment pour utilisation de substances dopantes ont contesté les interprétations (les contrôles antidopage. Dopage à l'insu des athlètes, contamination alimentaire, difficultés analytiques ou sécrétion naturelle des métabolites de la nandrolone à des taux proches de la limite de positivité, telles ont été certaines éventualités avancées pour expliquer les résultats positifs.
Cet article présente, nue étude, sur les concentrations physiologiques des métabolites de la nandrolone dans les urines humaines. Après extraction en phase solide sur colonne C18 Isolute, hYdrolyse par P-glucuronidase et purification par le pentane, les analytes sont dérivés par silylation. L'identification et la quantification de la 19-norandrosterone et de la 19-noretiocholanolone sont réalisées par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie (le, masse. L'injection s'effectue en mode pulsé.
La linéarité, le rendement d'extraction, la répétabilité et la limite de détection de Ici procédure analytique sont évalues. Les valeurs trouvées valident notre méthode.
A partir d'une soixantaine d'échantillons urinaires (provenant de sportifs de haut niveau et de la population normale), nous avons pu démontrer chez certains individus, une sécrétion physiologique des métabolites de la nandrolone. En règle générale, les concentrations obtenues sont inférieures à 0,5 ng/ml, donc à la limite de positivité proposée (2 ng/ml).
En revanche, la sécrétion naturelle de nandrolone chez les femmes enceintes a été confirmée. Les concentrations obtenues avoisinent le seuil de positivité.

SUMMARY

Nandrolone (19-nortestosterone) metabolites, norandrosteroue and noretiocholanolone were recently identified in urine speciniens of several athletes who all denied anabolic steroids doping. Analytical mistakes, poisoning or endogenous formation were proposed by the athletes to document the positive findings.
A study about the physiological concentrations of nandrolone metabolites in human urine is presented.
After the addition of noretiocholanolone-d1, as the internal standard, urine speciniens were extracted using solid-phase extraction. The evaporation of the eluent was followed by enzymatic hydrolysis with P-glucuronidase. After extraction with pentane and silylation, the derivatized steroids were analysed by gas chromatographylinass spectrometry after pulsed mode injection and selected ion monitoring.
Linearity, extraction recovery, repetability and limit of detection of the analytical procedure were established and found satisfactory.
From about 60 tested urinary samples, we showed a physiological excretion of nandrolone metabolites. All concentrations were clearly under the proposed positive cut-off level (2 mg/ml).
However a natural excretion of nandrolone was established for expectant mothers, with concentrations of metabolites about 2 mg/ml