Chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem: application au dosage des formes organiques de l'arsenic dans l'urine

Liquid chromatography-tandem mass spectrometry : application to arsenic organic species determination in urine

A. LE BOUIL*, A. CAILLEUX, A.TURCANT, P. ALLAIN

Laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie, CHU d'ANGERS
*Auteur à qui adresser la correspondance : A. LE BOUIL, Laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie, CHU, 4, rue Larrey - 49033 ANGERS Cedex 01 - Tél. : 33 (0)2 41 35 36 44 - Fax : 33 (0)2 41 35 48 77

RÉSUMÉ

La chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem avec ionisation de type electrospray (LCES-MS-MS) a été évaluée pour la spéciation des principales formes d'arsenic organique présentes dans l'urine. La séparation des quatre produits étudiés : acide monométhylarsonique (MMA), acide diméthylarsenique (DMA), arsénobétaine (AsB) et arsenocholine (AsC), n'est pas obtenue par chromatographie en phase inversée. Cependant au mveau de la quantification, l'acquisition en mode "multiple reaction monitoring" (MRM) permet une résolution complète des signaux analytiques. Le problème majeur rencontré lors de l'injection directe de matrices très chargées comme l'urine est lié à l'effet matrice se traduisant par une diminution importante du signal analytique. Une purification préalable de l'échantillon est indispensable. Le MMA et le DMA ont pu être dosés simultanément dans l'urine après une purification de l'échantillon par une double extraction liquide- liquide.Cette méthode validée est décrite.

MOTS-CLÉS: LC-ES-MS-MS, dérivés organiques de l'arsenic, effet-matrice.

SUMMARY

Liquid chromatography-tandem mass spectrometry with electrospray ionization (LC-ES-MS-MS) was evaluated for the speciation of the main organic arsemc compounds present in human. urine: monomethylarsonic acid (MMA), dimethylarsonic acid (DMA), arsenobetaine (AsB) and arsenocholine (AsC). Using reversed-phase chromatography a complete chromatographic separation of the four compounds was not achieved . However regarding quantification, a complete resolution of the analytic signals vvas obtained using the "Multiple Reaction Momtoring" (MRM) acquisition mode. Using LC-ES-MS-MS, the main problem found when directly injecting matrices with a high salt content such as urine is not the chromatographic separation of the analytes but their separation from the matrix components because of the important matrix-effect causing analyte signal suppression. A method for the simultaneous measurement of MMA and DMA in urine, afier sample purification by a liquid-liquid phase extraction procedure is described.

KEY-WORDS: LC-ES-MS-MS , organic arsenic compounds, matrix-effect.