Dosage par LC-MS des énantiomères de la méthadone dans la sueur
Sweat testing for methadone enantiomers by LC-MS
C. MARZULLO(1), P. KINTZ(2) , A. TRACQUI(2), A. DARREYE (3), F. TREMEAU(3) ,
P. GRETH(3), B. LUDES(2)

(1) Laboratoire de Biochimie, Centre Hospitalier Émile Muller, 20, rue du Dr Laennec - 68070 MULHOUSE Cedex
(2) Institut de Médecine Légale, 11, rue Humann - 67000 STRASBOURG
(3) Centre de Soins pour Toxicomanes, 9, rue Schlumberger - 68100 MULHOUSE

* Tirés à part : C. MARZULLO, Laboratoire de Biochimie, Centre Hospitalier Émile Muller,
20, rue du Dr Laennec - 68070 MULHOUSE Cedex - Tél. : 03 89 64 77 80 - Fax : 03 89 64 77 83

RESUME

Le but de ce travail est double : étudier l'excrétion de la méthadone dans la sueur et déteminer la concentration des énantiomères de la méthadone présents dans la sueur pour aider à éclaircir les mécanismes d'incorporation de la méthadone dans les cheveux. La sueur a été recueillie à l'aide de patchs Pharm Check II, appliqués pendant 72 heures consécutives à 20 patients en traitement de substitution par la méthadone dont la posologie journalière variait de 80 à 100 mg. La méthadone présente dans la sueur a été extraite par 5 ml de méthanol en présence de 200 ng de racémique de méthadone-d3 (standard interne). La séparation des énantiomères de la méthadone est obtenue grâce à une colonne chiral-AGP 5 juin (100 x 4 mm DI) de ChromTech en présence d'un gradient de phase mobile binaire isopropanol / NH4COOH 2 mM, pH 5.8. La détection est réalisée par spectromètrie de masse avec une interface de type electrospray.

L'excrétion de la méthadone dans la sueur présente de grandes variations interindividuelles. La concentration en R-méthadone (forme active) varie de 26 à 1118 ng1patch, celle de S-méthadone de 28 à Il 14 ng Ipatch. L'énantiomère R de la méthadone semble prédominant dans la sueur (ratio R-méthadone et S-méthadone compris entre 0.72 et 2.66, 15 ratios sur 20 étant supérieurs à 1.00). Enfin, aucune corrélation n'a été retrouvée entre la dose de méthadone administrée et la concentration de méthadone dans la sueur.

MOTS-CLÉS
Sueur, méthadone, séparation chirale, chromatographie liquide spectrométrie de masse.

SUMMARY
The aim of this work was first to study the excretion of methadone in sweat and secondly to use the enantioselective determination of methadone in sweat to help clarify the mechanisms involved in the process of drug incorporation by hair . Sweat was collected from 20 subjets taking part in a methadone substitution program (daily dose in the range of 80- 100 mg) using a PharmCheck II sweat patch applied for 72 h. Methadone was extracted from the pad in 5 ml methanol in the presence of 200 ng of methadone-d3 (internal standard). Enantioselective separation of methadone was obtained using a 5 µm chiral-AGP Chromtech column (100 by 4.0 mm ID) and a gradient of isopropanol in 2 mM, pH 5.8 NH4COOH. MS detection was carried out using a Perkin Elmer Sciex API-100 with an electrospray   interface.
A large intersubject variability was observed for methadone excretion in sweat. The concentration of R-methadone (active form) ranged from 26 to 1118 ng/patch and that of S methadone from 28 to 1114 ng/patch. Results suggest a predominance of methadone's R-enantiomer in sweat (the ratio between R- and S-methadone ranged between 0. 72 and 2.66 and was higher than 1. 00 in 15 samples). No correlation between the administered dose of methadone and the concentration of methadone in sweat was observed.

KEY- WORDS
Sweat, methadone, chiral separation, liquid chromatography/mass spectrometry.